微生物鑒定質(zhì)譜儀通過(guò)測量帶電粒子在電場(chǎng)或磁場(chǎng)中的運動(dòng)來(lái)確定其質(zhì)量與電荷比（m/z）。具體到MALDI-TOFMS，它通過(guò)激光使樣品中的分子解吸和電離，然后測量這些離子飛行時(shí)間（TOF）以確定其m/z。由于不同微生物的蛋白質(zhì)圖譜，因此可以利用這些圖譜進(jìn)行微生物的鑒定和分類(lèi)。
樣品制備
1.純培養物的獲?。簽榱双@得準確的結果，首先需要從臨床樣本中分離出純培養物。這通常通過(guò)在選擇性培養基上單菌落分離來(lái)實(shí)現。
2.樣品處理：取少量純培養物，用于質(zhì)譜分析。具體步驟包括：
-直接轉移法：將菌落直接轉移到質(zhì)譜靶板上。
-提取法：對于一些難以直接分析的菌種，可以先進(jìn)行蛋白質(zhì)提取。例如，革蘭氏陰性菌可以用乙醇-甲酸進(jìn)行簡(jiǎn)單提取。
3.基質(zhì)添加：在樣品上加入基質(zhì)（如α-氰基-4-羥基肉桂酸），基質(zhì)在激光照射下幫助樣品分子解吸和電離。
質(zhì)譜分析
1.儀器校準：使用已知標準品對微生物鑒定質(zhì)譜儀進(jìn)行校準，以確保測量的準確性。
2.數據采集：將準備好的樣品靶板放入質(zhì)譜儀，設定適當的激光強度和其他參數，進(jìn)行數據采集。
3.數據處理：生成的原始數據通常是一個(gè)復雜的譜圖。通過(guò)專(zhuān)門(mén)的軟件將這些譜圖轉換為可識別的蛋白質(zhì)圖譜。
數據分析與解釋
1.數據庫匹配：利用數據庫中的參考譜圖對樣品的質(zhì)譜圖進(jìn)行匹配。當前市面上有許多商業(yè)化的微生物質(zhì)譜數據庫，如MALDIBiotyper和VITEKMS。
2.判定標準：匹配結果根據相似度得分進(jìn)行判斷。通常，得分越高，匹配越準確。各公司提供的質(zhì)譜數據庫都有自己的得分閾值，超過(guò)該閾值即可認為鑒定結果可靠。
3.結果驗證：對于罕見(jiàn)或鑒定結果不明確的菌種，可以通過(guò)16SrRNA基因測序等方法進(jìn)一步驗證。
注意事項與常見(jiàn)問(wèn)題
1.樣品純度：混合菌樣品可能導致質(zhì)譜圖復雜化，影響鑒定準確性。因此，確保樣品純度至關(guān)重要。
2.儀器維護：定期校準和維護儀器，以保證其穩定性和準確性。
3.數據庫更新：持續更新質(zhì)譜數據庫，以包含新的微生物譜圖，提高鑒定的覆蓋廣度和準確度。
